SREBP-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423152

Panoramica

Srebf1 codifica la sterol regulatory element-binding protein 1 (SREBP-1), un fattore di trascrizione ancorato alla membrana che viene attivato per via proteolitica per controllare programmi di metabolismo dei lipidi e dei carboidrati. Nelle cellule di topo, SREBP-1 promuove l’espressione degli enzimi necessari per la sintesi de novo di acidi grassi e trigliceridi e collega segnali nutrizionali e ormonali alle reti geniche lipogeniche tramite una regolazione trascrizionale dipendente da SREBP. Questa via si integra con la segnalazione dell’insulina e di mTOR, con l’omeostasi del reticolo endoplasmatico (RE) e con la biogenesi di membrana, influenzando l’adipogenesi e il rimodellamento metabolico degli epatociti. Un’attività deregolata di SREBP-1 è ampiamente utilizzata come asse meccanicistico in modelli di steatosi epatica, insulino-resistenza associata all’obesità e infiammazione guidata dai lipidi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SREBP-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Srebf1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Srebf1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Srebf1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SREBP-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Srebf1 per lo studio della segnalazione di SREBP-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Srebf1 critici per la funzione di SREBP-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Srebf1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SREBP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SREBP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Srebf1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SREBP-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SREBP-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Srebf1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Srebf1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.