Sptrx-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413575-ACT

O TXNDC2 humano codifica a proteína Sptrx-1 (sperm-specific thioredoxin domain-containing protein), um fator redoxativo enriquecido na linhagem germinativa masculina que sustenta a troca tiol–dissulfeto durante a maturação de espermátides. A Sptrx-1 contribui para o dobramento oxidativo de proteínas e para a remodelação de pontes dissulfeto que sustentam a modelagem da cabeça do espermatozoide, o empacotamento da cromatina e a estrutura do flagelo, conectando-se à homeostase redox celular e a processos de controle de qualidade proteica. O desequilíbrio redox em células germinativas em desenvolvimento está associado a função espermática prejudicada, e alterações na atividade de TXNDC2 têm sido estudadas no contexto de infertilidade masculina e de fenótipos reprodutivos relacionados ao estresse oxidativo. Como regulador redox com viés de expressão testicular, o TXNDC2 oferece um alvo acessível para investigar como vias dependentes de tioredoxina influenciam a espermatogênese e a resiliência das células germinativas.

Sptrx-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TXNDC2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sptrx-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TXNDC2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TXNDC2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sptrx-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TXNDC2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sptrx-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sptrx-1 em células tumorais com expressão de TXNDC2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.