SPRED2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404738-NIC

SPRED2（Sprouty related EVH1 domain containing 2）は細胞質に局在するアダプタータンパク質で、RAF/MEK/ERK（MAPK）経路の活性化を抑制することにより、受容体型チロシンキナーゼ（RTK）シグナル伝達の負の制御因子として機能します。RAF などの構成要素と相互作用し、RAS 依存性シグナル伝達複合体を調節することで、SPRED2 は増殖因子によって駆動される細胞増殖、分化、炎症応答の制御に寄与します。SPRED2 の発現や機能の変化は、がん生物学や免疫介在性プロセスに広く関与する MAPK シグナル伝達プログラムの破綻と関連づけられており、シグナル減衰およびフィードバック制御を研究するための結節点（ノード）としての有用性を支持します。ヒト細胞では、SPRED2 の撹乱は、MAPK シグナルと下流の転写応答および細胞骨格アウトプットとの間の経路クロストークを検証するための扱いやすいアプローチとなります。

SPRED2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SPRED2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SPRED2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SPRED2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SPRED2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。