SPRED2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-431133-ACT

Spred2は、RAS–RAF–MEK–ERK/MAPKカスケードを抑制することで受容体型チロシンキナーゼシグナル伝達を負に制御する、Sprouty関連アダプタータンパク質であるSPRED2をコードします。RAFおよび関連するシグナル伝達複合体との相互作用を介して、SPRED2は増殖、分化、遊走、炎症関連遺伝子発現といった、増殖因子によって駆動される出力の形成に寄与します。マウス系では、SPRED2活性の変化がMAPKシグナル伝達ダイナミクスの破綻や、それに続く免疫および組織恒常性の下流変化と関連づけられています。経路のブレーキとしてのSPRED2は、ERKシグナルの強度や持続時間が、がん化モデル、血管生物学、炎症関連病態に関わる表現型に影響する状況で、しばしば研究対象となります。

SPRED2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Spred2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SPRED2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Spred2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSpred2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SPRED2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSpred2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSPRED2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSpred2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSPRED2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。