SPARC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423101

Panoramica

Il gene Sparc del topo codifica per SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine), una glicoproteina matricellulare che modula l’organizzazione della matrice extracellulare, la deposizione di collagene e le interazioni cellula–matrice. SPARC influenza la segnalazione mediata dalle integrine, la dinamica delle adesioni focali e la disponibilità dei fattori di crescita, plasmando processi quali adesione, migrazione, proliferazione e rimodellamento tissutale. Un’alterata espressione di SPARC è associata a fibrosi e a un rimodellamento stromale aberrante, ed è frequentemente studiata nei contesti della riparazione delle ferite, della biologia vascolare e della regolazione del microambiente tumorale. Nei sistemi immunitario e muscoloscheletrico, segnali della matrice dipendenti da SPARC possono influenzare l’infiammazione, l’osteogenesi e le proprietà meccaniche dei tessuti connettivi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SPARC (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sparc in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sparc insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sparc a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SPARC.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sparc per lo studio della segnalazione di SPARC, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sparc critici per la funzione di SPARC
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sparc per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SPARC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SPARC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sparc. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SPARC Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SPARC (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sparc per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sparc definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.