SPARC CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423101

概要

マウスSparcは、SPARC（secreted protein acidic and rich in cysteine）をコードしており、これは細胞外マトリックス（ECM）の組織化、コラーゲン沈着、ならびに細胞—マトリックス相互作用を調節するマトリセルラー型糖タンパク質です。SPARCはインテグリンシグナル伝達、フォーカルアドヒージョンの動態、増殖因子の利用可能性に影響を与え、接着、遊走、増殖、組織リモデリングといった過程を制御します。SPARC発現の変化は線維化や異常な間質リモデリングと関連しており、創傷治癒、血管生物学、腫瘍微小環境の制御といった文脈でしばしば研究されています。免疫系および筋骨格系においては、SPARC依存的なマトリックス由来のシグナルが、炎症、骨形成、結合組織の機械的特性に影響を及ぼし得ます。

SPARC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSparc遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sparc内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sparcのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SPARCタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SPARCシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sparc欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SPARCの機能に不可欠なSparcエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sparcゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SPARC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSPARC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sparc遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SPARC HDRプラスミド（m）および SPARC HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSparcホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSparc標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。