Sp1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423094

Panoramica

Sp1 (specificity protein 1) è un fattore di trascrizione a dita di zinco espresso in modo ubiquitario, che si lega a elementi promotori ricchi di GC per regolare la trascrizione basale e inducibile in diversi programmi genici. Nelle cellule murine, Sp1 integra segnali provenienti dalle vie MAPK/ERK, PI3K/AKT e da percorsi sensibili allo stress per coordinare la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA, il rimodellamento della cromatina e l’omeostasi metabolica. Attraverso interazioni con co-regolatori come p300/CBP e complessi HDAC, Sp1 contribuisce a modulare l’output trascrizionale di geni coinvolti in proliferazione, apoptosi e differenziamento. Un’attività deregolata di Sp1 è stata implicata in reti trascrizionali oncogeniche, nella segnalazione infiammatoria e in cambiamenti dell’espressione genica associati alla neurodegenerazione, rendendolo un nodo chiave per studi meccanicistici del controllo trascrizionale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Sp1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Sp1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sp1 per lo studio della segnalazione di Sp1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sp1 critici per la funzione di Sp1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sp1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Sp1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Sp1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Sp1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Sp1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.