SP-D Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401572-ACT

Il gene umano **SFTPD** codifica la proteina del surfattante D (**SP-D**), una lectina di tipo C contenente collagene (collectina) secreta principalmente dalle cellule alveolari di tipo II e dall’epitelio delle vie aeree, che si lega a glicani associati a patogeni e a danno per promuovere opsonizzazione e agglutinazione. SP-D modula la segnalazione dell’immunità innata influenzando i processi correlati al complemento e regolando il tono infiammatorio nel polmone, inclusi effetti sull’attivazione dei macrofagi e sulla produzione di citochine. Attraverso queste attività contribuisce all’omeostasi del surfattante e alla difesa mucosale all’interfaccia aria–liquido. Un’alterata espressione di SFTPD o la funzione di SP-D è stata collegata a una disregolazione dell’infiammazione polmonare e alla suscettibilità a fenotipi di malattie respiratorie, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici in modelli delle vie aeree e degli alveoli.

SP-D Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SFTPD senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SP-D Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SFTPD nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SFTPD, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SP-D. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SFTPD nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SP-D nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SP-D nelle cellule tumorali con espressione di SFTPD silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.