Sox9 Double Nickase Plasmid (h): sc-400143-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Sox9 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Sox9 Double-Nickase-Plasmid (h) und Sox9 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SOX9 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Sox9: sc-166505
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Sox9 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400143-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Sox9 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400143-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SOX9 kodiert den Transkriptionsfaktor Sox9, ein DNA-bindendes Protein der High-Mobility-Group-(HMG)-Familie, das die Linienfestlegung und Differenzierungsprogramme in zahlreichen Geweben reguliert. Während der Entwicklung und in der Homöostase des adulten Organismus integriert Sox9 Signaleingänge wie TGF-β/BMP, WNT/β-Catenin, Hedgehog und Notch, um Gennetzwerke zu steuern, die an der Chondrogenese, der Aufrechterhaltung von Stamm-/Vorläuferzellen und an Schicksalsentscheidungen epithelialer Zellen beteiligt sind. Die SOX9-Aktivität beeinflusst die Produktion der extrazellulären Matrix sowie die Zellzyklusdynamik durch direkte transkriptionelle Kontrolle von Ziel-Loci und durch Zusammenarbeit mit Partner-Transkriptionsfaktoren. Eine fehlregulierte SOX9-Expression oder -Funktion wurde mit angeborenen Skeletterkrankungen in Verbindung gebracht und trägt zu pathogenen Zuständen bei, die mit abweichender Differenzierung und onkogenen Transkriptionsprogrammen einhergehen; daher wird SOX9 häufig als zentraler Ansatzpunkt für mechanistische Studien zur Entwicklungs- und Krankheitsbiologie genutzt.
Sox9 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SOX9-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SOX9 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SOX9-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SOX9-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.