Sox9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423093-ACT

O Sox9 de camundongo codifica um fator de transcrição do tipo high-mobility group (HMG) box que atua como um regulador mestre da especificação de linhagens e da morfogênese tecidual. Ele integra sinais de desenvolvimento, incluindo as vias TGF‑β/BMP, Wnt/β‑catenina e Hedgehog, para controlar programas envolvidos na condrogênese, na produção de matriz extracelular e na diferenciação epitelial. A atividade de Sox9 molda decisões de destino celular e a manutenção de progenitores por meio do controle transcricional de genes como Col2a1 e Acan, com comunicação cruzada dependente do contexto com fatores da família Runx. A expressão ou função desregulada de Sox9 está implicada em defeitos esqueléticos congênitos, remodelamento associado à fibrose e plasticidade de linhagem associada ao câncer, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos do desenvolvimento e da reprogramação transcricional relacionada a doenças.

Sox9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sox9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sox9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sox9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sox9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sox9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sox9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sox9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sox9 em células tumorais com expressão de Sox9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.