SOCS-6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402344-ACT

Il gene umano SOCS6 (suppressor of cytokine signaling 6) codifica SOCS-6, una proteina adattatrice contenente un dominio SH2 e componente di una ligasi E3 dell’ubiquitina, che attenua la segnalazione dei recettori tirosin-chinasici e dei recettori per citochine. Tramite il suo SOCS box, SOCS-6 può collegare complessi di segnalazione attivati al macchinario di ubiquitinazione elongin B/C–cullina, influenzando il turnover proteico e la dinamica a valle delle vie MAPK/ERK, PI3K–AKT e JAK/STAT. L’attività di SOCS6 contribuisce alla regolazione di proliferazione, sopravvivenza e differenziamento cellulare modulando i circuiti di feedback della segnalazione indotta dai fattori di crescita. Un’espressione o una funzione deregolata di SOCS6 è stata associata ad alterazioni della segnalazione oncogenica e delle reti oncosoppressive in diversi contesti tumorali, a supporto della sua utilità negli studi meccanicistici delle vie di segnalazione.

SOCS-6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOCS6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SOCS-6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOCS6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOCS6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SOCS-6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOCS6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SOCS-6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SOCS-6 nelle cellule tumorali con espressione di SOCS6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.