SOCS-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400618-ACT

O SOCS1 humano codifica a SOCS-1, um importante regulador negativo intracelular da sinalização de receptores de citocinas, que restringe a atividade da via JAK/STAT por meio do reconhecimento, mediado por SH2, de motivos de fosfotirosina e do direcionamento ao sistema ubiquitina–proteassoma via sua SOCS box. Ao atenuar a sinalização a jusante de interferons, interleucinas e outros estímulos inflamatórios, a SOCS-1 ajuda a manter a homeostase imunológica, modula a função de células apresentadoras de antígeno e limita programas transcricionais inflamatórios excessivos. A expressão ou atividade desregulada de SOCS1 tem sido associada à ativação imune aberrante e a contextos de sinalização oncogênica nos quais a ativação persistente de STAT contribui para alterações de proliferação e sobrevivência. Essas propriedades fazem da SOCS-1 um nó útil para estudar inibição por retroalimentação, responsividade a citocinas e adaptação transcricional em modelos de biologia imune e do câncer.

SOCS-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOCS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SOCS-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOCS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOCS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SOCS-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOCS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SOCS-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SOCS-1 em células tumorais com expressão de SOCS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.