SNX4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404032-ACT

SNX4 umano (sorting nexin 4) è un fattore del traffico endosomiale contenente un dominio PX-BAR che lega i fosfoinositidi e modella le membrane per supportare il riciclo del carico internalizzato. SNX4 partecipa alle vie di recupero dall’endosoma alla membrana plasmatica e contribuisce a mantenere la disponibilità dei recettori e l’output di segnalazione coordinando lo smistamento del carico con la formazione di tubuli endosomiali. Attraverso il suo ruolo nel trasporto vescicolare, SNX4 influenza processi cellulari quali l’assorbimento di nutrienti, l’omeostasi di membrana e la regolazione spaziale delle vie di segnalazione. Un riciclo endosomiale deregolato e alterazioni della funzione delle sorting nexin sono spesso associati a dinamiche recettoriali modificate e a difetti della proteostasi rilevanti per la biologia del cancro e la ricerca sulla neurodegenerazione.

SNX4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SNX4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SNX4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SNX4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SNX4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SNX4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SNX4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SNX4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SNX4 nelle cellule tumorali con espressione di SNX4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.