SNX3 Plasmide Double Nickase (h): sc-404028-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SNX3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SNX3 Double Nickase Plasmid (h) e il SNX3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SNX3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SNX3 Antibody (G-7): sc-376667
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SNX3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404028-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SNX3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404028-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SNX3 (sorting nexin 3) è una sorting nexin con dominio PX che si lega al fosfatidilinositolo 3-fosfato sugli endosomi precoci e aiuta a organizzare lo smistamento dei carichi attraverso il sistema endosomiale. È un componente chiave del traffico associato al retromer, supportando il recupero endosoma-Golgi e il riciclo regolato delle proteine di membrana, modellando così la disponibilità dei recettori e la segnalazione a valle. Attraverso i suoi ruoli nel rimodellamento delle membrane e nella selezione dei carichi, SNX3 influenza processi quali l’assorbimento dei nutrienti, l’attenuazione del segnale e il mantenimento della polarità cellulare. Le vie di traffico endosomiale deregolate che coinvolgono SNX3 e la funzione del retromer sono spesso analizzate nel contesto della neurodegenerazione, dell’ingresso dei patogeni e dell’alterata segnalazione dei recettori osservata in molteplici modelli di malattia.
SNX3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SNX3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SNX3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SNX3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SNX3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.