Smad5 Plasmide Double Nickase (h): sc-400443-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Smad5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Smad5 Double Nickase Plasmid (h) e il Smad5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SMAD5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Smad5 Antibody (YY-6): sc-101151
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Smad5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400443-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Smad5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400443-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SMAD5 codifica il fattore di trascrizione regolato dal recettore Smad5, un mediatore centrale della segnalazione BMP a valle dei recettori serina/treonina chinasi di tipo I/II. In seguito alla fosforilazione dipendente da BMP, Smad5 forma complessi con SMAD4 e trasloca nel nucleo per controllare programmi genici che regolano proliferazione, differenziamento, apoptosi e specificazione di linea cellulare. L’attività di SMAD5 è particolarmente rilevante per la biologia ematopoietica ed endoteliale e per i processi di patterning dello sviluppo controllati dai gradienti di BMP. Una segnalazione SMAD5/BMP deregolata è stata associata ad anomalie congenite e al rimodellamento di vie di segnalazione legate al cancro, rendendo SMAD5 un nodo utile per analizzare output trascrizionali specifici del contesto.
Smad5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SMAD5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SMAD5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SMAD5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SMAD5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.