Smad3 Plasmide Double Nickase (h): sc-400069-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Smad3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Smad3 Double Nickase Plasmid (h) e il Smad3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SMAD3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Smad3 Antibody (38-Q): sc-101154
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Smad3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400069-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Smad3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400069-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SMAD3 codifica Smad3, un trasduttore di segnale e regolatore trascrizionale che media la segnalazione canonica TGF-β/Activin a valle di chinasi recettoriali serina/treonina. In seguito alla fosforilazione del C-terminale, Smad3 forma complessi con SMAD4 e trasloca nel nucleo per regolare geni che controllano l’arresto del ciclo cellulare, il rimodellamento della matrice extracellulare, la differenziazione e la modulazione immunitaria. L’attività di Smad3 si integra con le vie MAPK, PI3K/AKT e Wnt per determinare output trascrizionali dipendenti dal contesto e la regolazione tramite feedback. Una segnalazione SMAD3 deregolata è stata associata a fibrosi, progressione tumorale e meccanismi di malattie infiammatorie, rendendola un bersaglio frequente per lo studio delle vie di segnalazione in modelli cellulari umani.
Smad3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SMAD3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SMAD3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SMAD3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SMAD3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.