SLP-76 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401421-ACT

LCP2は、造血系細胞において免疫受容体の刺激を下流シグナルへと結び付けるのに必須な細胞質アダプタータンパク質であるSLP-76をコードしている。T細胞受容体（TCR）またはFc受容体の刺激により、SLP-76はLAT、VAV1、ITK、PLCγと多タンパク質複合体を形成し、カルシウム流入、MAPK活性化、細胞骨格再編成、ならびにリンパ球の活性化と分化を制御する転写プログラムを調節するリン酸化カスケードを協調的に制御する。これらの経路を介して、SLP-76はインテグリン依存的接着、免疫シナプス形成、エフェクター応答に影響を与え、抗原受容体シグナル伝達のダイナミクスを研究するうえで中心的な結節点となる。SLP-76関連ネットワークを含む近位シグナル伝達の破綻は免疫機能障害や炎症性表現型と関連しており、免疫細胞シグナル伝達の機構モデルにおける標的としての有用性を支持している。

SLP-76 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LCP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SLP-76 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LCP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLCP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SLP-76の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLCP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSLP-76依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLCP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSLP-76経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。