SLC25A18 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-413500

Panoramica

SLC25A18 codifica un trasportatore della membrana interna mitocondriale della famiglia SLC25, coinvolto nel trasporto del glutammato attraverso la membrana mitocondriale e nel supporto del flusso di azoto tra citosol e mitocondri. Modulando la disponibilità mitocondriale di amminoacidi, SLC25A18 contribuisce all’omeostasi bioenergetica, all’equilibrio redox e all’alimentazione anaplerotica del ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA), influenzando così le risposte cellulari allo stress da carenza di nutrienti. Un’alterata gestione del glutammato a livello mitocondriale è rilevante per il rimodellamento metabolico e per le vie dello stress ossidativo, spesso studiate nella biologia del cancro e nelle disfunzioni neurometaboliche. SLC25A18 è quindi utilizzato come sonda per studiare il trasporto mitocondriale di substrati, il metabolismo degli amminoacidi e le reti di segnalazione centrate sui mitocondri.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC25A18 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC25A18 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC25A18 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC25A18 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SLC25A18.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC25A18 per lo studio della segnalazione di SLC25A18, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC25A18 critici per la funzione di SLC25A18
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC25A18 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SLC25A18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SLC25A18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC25A18. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SLC25A18 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SLC25A18 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC25A18 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC25A18 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.