SLC12A8 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-431364-ACT

Slc12a8はSLC12A8をコードしており、SLC12A8は膜のイオン勾配を調節し、上皮および細胞の浸透圧恒常性に寄与する、陽イオン共役型トランスポーターからなる溶質キャリア12（SLC12）ファミリーの一員である。Na⁺/K⁺/Cl⁻の共役フラックスとそれに関連する電気化学的駆動力を調節することで、SLC12A8は細胞容積の制御、上皮を介した輸送過程、ならびに代謝経路やストレス応答経路に結び付く下流シグナル伝達に影響し得る。SLC12トランスポーターの活性変化は電解質バランスや組織生理の破綻と関連することが多く、Slc12a8は正常時および疾患関連状況におけるトランスポーター依存的機序を検討するうえで有用な標的となる。マウスモデルでは、Slc12a8の制御を利用して、イオン輸送がバリア機能、炎症、代謝適応とどのように結び付くかを解析できる。

SLC12A8 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Slc12a8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SLC12A8 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Slc12a8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSlc12a8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SLC12A8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSlc12a8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSLC12A8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSlc12a8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSLC12A8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。