SKT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431571

Panoramica

Mouse Etl4 codifica la proteina SKT, un fattore poco caratterizzato che si prevede contribuisca a programmi regolatori cellulo-intrinseci che controllano l’espressione genica e l’omeostasi cellulare. Le annotazioni disponibili suggeriscono un coinvolgimento in processi fondamentali quali proliferazione, differenziamento e risposte adattative allo stress, in linea con ruoli nelle vie di sviluppo e di mantenimento dei tessuti. Poiché regolatori di questo tipo possono influenzare l’architettura delle vie di segnalazione e la stabilità fenotipica, la perturbazione di SKT è utile per esplorare i meccanismi alla base di stati cellulari rilevanti per la malattia, inclusi crescita disregolata e programmi di linea cellulare alterati. Modelli di perdita di funzione di Etl4/SKT consentono di mappare le conseguenze trascrizionali e di segnalazione a valle in cellule murine e in contesti in vivo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SKT (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Etl4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Etl4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Etl4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SKT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Etl4 per lo studio della segnalazione di SKT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Etl4 critici per la funzione di SKT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Etl4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SKT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SKT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Etl4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SKT Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SKT (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Etl4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Etl4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.