Six5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410513

Panoramica

SIX5 codifica il fattore di trascrizione umano homeobox Six5, un regolatore che si lega al DNA e contribuisce a coordinare i programmi di espressione genica durante lo sviluppo e la differenziazione dei tessuti. Six5 è associato al controllo di reti trascrizionali che governano le decisioni di destino cellulare e può interfacciarsi con vie legate alla progressione del ciclo cellulare e alla regolazione di geni responsivi allo stress. Alterazioni del dosaggio di SIX5 o una sua espressione deregolata sono state implicate in fenotipi rilevanti per la malattia, incluse caratteristiche associate alla distrofia miotonica di tipo 1, attraverso effetti su loci adiacenti e paesaggi regolatori condivisi. Poiché Six5 influenza la trascrizione specifica di linea e l’omeostasi cellulare, viene spesso studiato in modelli di biologia dello sviluppo, funzione neuromuscolare e deregolazione trascrizionale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Six5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SIX5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SIX5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SIX5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Six5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SIX5 per lo studio della segnalazione di Six5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SIX5 critici per la funzione di Six5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SIX5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Six5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Six5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SIX5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Six5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Six5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SIX5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SIX5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.