Plásmido CRISPR de Activación (h) Six1: sc-402063-ACT

SIX1 codifica Six1, un factor de transcripción homeobox que regula programas del desarrollo embrionario, incluyendo la organogénesis, la miogénesis y la formación de placodas sensoriales, al coordinar redes de expresión génica específicas de linaje. Six1 funciona dentro de circuitos reguladores de la transcripción que interactúan con vías de señalización del desarrollo como WNT, FGF y TGF-β, moldeando las decisiones de destino celular, la proliferación y la diferenciación. En tejidos adultos, la expresión desregulada de SIX1 puede promover estados transcripcionales aberrantes vinculados a la transición epitelio-mesenquimal, programas asociados a la invasión y un control alterado del ciclo celular. Como resultado, SIX1 se estudia ampliamente como impulsor de la reactivación de genes del desarrollo en biología del cáncer y como determinante de fenotipos de diferenciación específicos de tejido.

Six1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SIX1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Six1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SIX1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SIX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Six1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SIX1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Six1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Six1 en células tumorales con expresión de SIX1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.