Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SIRT1 Plasmide Double Nickase (m): sc-430046-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SIRT1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SIRT1 Double Nickase Plasmid (m) e il SIRT1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Sirt1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SIRT1 Antibody (B-7): sc-74465
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SIRT1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-430046-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SIRT1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-430046-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Sirt1 codifica SIRT1, una deacetilasi dipendente da NAD⁺ che collega lo stato energetico cellulare al rimodellamento della cromatina e al controllo trascrizionale. SIRT1 regola l’acetilazione di fattori chiave, tra cui p53, le proteine FOXO, PGC-1α e NF-κB, influenzando così le risposte allo stress, la biogenesi mitocondriale, l’infiammazione, l’autofagia e i checkpoint del ciclo cellulare. Attraverso il crosstalk con la segnalazione AMPK–mTOR e con le vie metaboliche, SIRT1 contribuisce a risposte adattative alla disponibilità di nutrienti e allo stress ossidativo. Un’alterata attività di SIRT1 è stata associata, nei sistemi modello, a disfunzioni metaboliche, a processi legati alla neurodegenerazione e alla biologia tumorale, rendendola un nodo ampiamente studiato nelle reti epigenetiche e di segnalazione.
SIRT1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sirt1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sirt1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sirt1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sirt1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.