Sigma Receptor Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422068-ACT

Sigmar1 codifica o receptor sigma-1, uma chaperona de membrana do retículo endoplasmático (RE) enriquecida nas membranas do RE associadas às mitocôndrias, onde modula a troca de Ca2+ entre RE e mitocôndrias, a proteostase e as respostas celulares ao estresse. O receptor sigma-1 interage com canais iônicos e complexos de sinalização para influenciar a neurotransmissão, a remodelação lipídica e a homeostase redox, integrando vias ligadas à resposta a proteínas mal dobradas e à bioenergética mitocondrial. Em sistemas murinos, a atividade de Sigmar1 tem sido associada à manutenção neuronal, à plasticidade sináptica e à regulação da sinalização inflamatória em contextos gliais e do sistema imune periférico. A desregulação da homeostase dependente do receptor sigma-1 é investigada em modelos de neurodegeneração, dor neuropática e estresse cardiometabólico, reforçando sua relevância para a investigação de vias mecanísticas.

Sigma Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sigmar1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sigma Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sigmar1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sigmar1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sigma Receptor. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sigmar1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sigma Receptor no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sigma Receptor em células tumorais com expressão de Sigmar1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.