Shank 3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425500

Panoramica

Shank3 codifica Shank 3, una proteina di impalcatura multidominio concentrata nelle densità postsinaptiche eccitatorie, dove organizza le sinapsi glutamatergiche collegando recettori ed enzimi di segnalazione al citoscheletro di actina. Attraverso interazioni con i complessi PSD-95/GKAP/Homer, Shank 3 supporta la maturazione sinaptica, la morfogenesi delle spine e la plasticità dipendente dall’attività, integrando vie come la segnalazione mGluR, le cascate CaMK/ERK e il rimodellamento del citoscheletro. Nel topo, la funzione di Shank3 è ampiamente utilizzata per studiare i meccanismi dell’omeostasi sinaptica e della connettività dei circuiti alla base dei fenotipi del neurosviluppo. L’alterazione delle reti associate a SHANK3 è collegata alla biologia correlata al disturbo dello spettro autistico e alla sindrome di Phelan–McDermid, rendendolo un bersaglio chiave per modellare le sinaptopatie in sistemi sperimentali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Shank 3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Shank3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Shank3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Shank3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Shank 3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Shank3 per lo studio della segnalazione di Shank 3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Shank3 critici per la funzione di Shank 3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Shank3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Shank 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Shank 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Shank3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Shank 3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Shank 3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Shank3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Shank3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.