Sgo2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404058-ACT

O SGO2 humano codifica a shugoshin 2 (Sgo2), um protetor da coesina associado ao centrómero que ajuda a manter a coesão entre cromátides-irmãs e a segregação cromossómica correta durante a mitose e a meiose. A Sgo2 atua na regulação cinetócoro–centrómero, coordenando-se com sinalização dependente de fosfatases para contrariar a libertação prematura da coesina e apoiar a ligação adequada ao fuso e a fidelidade dos checkpoints. A perturbação da dinâmica de coesão regulada por SGO2 pode promover instabilidade cromossómica e aneuploidia, processos frequentemente implicados na biologia tumoral e em perturbações do desenvolvimento. Assim, o SGO2 é estudado em vias que ligam o controlo do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e a manutenção do genoma.

Sgo2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SGO2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sgo2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SGO2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SGO2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sgo2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SGO2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sgo2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sgo2 em células tumorais com expressão de SGO2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.