SFRS2B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401973-ACT

SRSF8 codifica o fator de splicing rico em serina/arginina SFRS2B, uma proteína de ligação a RNA que participa da montagem do spliceossomo e regula decisões de splicing alternativo de pré-mRNA. Por meio do reconhecimento de intensificadores exônicos de splicing e da coordenação da inclusão ou do skipping de éxons, o SFRS2B influencia a diversidade de isoformas de mRNA, a estabilidade dos transcritos e a composição do proteoma a jusante. A atividade de fatores de splicing cruza-se com o alongamento transcricional, o processamento de mRNA e o metabolismo de RNA responsivo ao estresse, moldando programas de estado celular como proliferação e diferenciação. O splicing alternativo desregulado e a expressão alterada de reguladores da família SR são características recorrentes na biologia de doenças humanas, sustentando a investigação de redes de isoformas dependentes de SRSF8 em contextos oncológicos e neurobiológicos.

SFRS2B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SRSF8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SFRS2B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SRSF8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SRSF8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SFRS2B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SRSF8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SFRS2B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SFRS2B em células tumorais com expressão de SRSF8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.