serum reponse factor /SRF Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-423154-LAC

Mouse Srf codifica il serum response factor (SRF), un fattore di trascrizione della famiglia MADS-box che si lega agli elementi di risposta al siero (SRE) per coordinare l’espressione dei geni immediate-early con la dinamica del citoscheletro. SRF integra segnali provenienti dal rimodellamento dell’actina mediato da RhoA e dalle vie MAPK/ERK per regolare programmi che controllano proliferazione, migrazione, differenziamento e risposte allo stress. Attraverso interazioni con cofattori quali myocardin e le MRTF, SRF modula reti geniche del muscolo liscio e cardiaco, oltre alla trascrizione neuronale dipendente dall’attività. Una segnalazione SRF deregolata è stata associata a rimodellamento anomalo e fenotipi di crescita in contesti cardiovascolari e neuromuscolari, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici del controllo trascrizionale in vie rilevanti per la patologia.

Le particelle di attivazione lentivirale serum reponse factor /SRF (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Srf in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale serum reponse factor /SRF (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Srf, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di serum reponse factor /SRF. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Srf e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.