SENP3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403747-ACT

ヒトSENP3は、SUMO特異的プロテアーゼをコードしており、SUMO2/3修飾を優先的に除去することで、タンパク質の安定性、局在、ならびに高分子複合体の組み立てを制御するSUMO化の状況（ランドスケープ）を再構築します。SENP3の活性は核小体の恒常性とリボソーム生合成に関連し、核内基質の動的な脱SUMO化を介して転写プログラムやストレス応答性シグナル伝達を調節します。細胞周期進行、ゲノム維持、炎症性シグナルのSUMO依存的制御に影響することから、プロテオスタシスや核内構造の破綻が生じる状況でSENP3は研究対象となっています。SENP3の発現または活性の破綻は、がん生物学、神経変性過程、ならびに心代謝・炎症性の表現型と関連づけられており、経路（パスウェイ）に焦点を当てた研究における機構的な要所（ノード）としての有用性を支持しています。

SENP3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SENP3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SENP3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SENP3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSENP3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SENP3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSENP3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSENP3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSENP3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSENP3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。