Plásmido CRISPR de Activación (h) SENP2: sc-402148-ACT

El gen humano **SENP2** codifica una proteasa específica de SUMO que revierte la SUMOilación mediante el procesamiento de precursores de SUMO y la desconjugación de SUMO de proteínas sustrato, modulando así la estabilidad, la localización y la actividad de las proteínas. A través del control dinámico de la señalización dependiente de SUMO, SENP2 influye en la regulación transcripcional, las respuestas al daño del ADN, la progresión del ciclo celular y las vías adaptativas al estrés, incluido el crosstalk con la proteostasis mediada por ubiquitina. Las alteraciones en la homeostasis de SUMO y la actividad desregulada de SENP2 se han asociado con cambios en la señalización inflamatoria, el mantenimiento del genoma y programas oncogénicos, lo que respalda su relevancia en estudios de biología del cáncer y fenotipos celulares relacionados. SENP2 también se utiliza como un nodo para analizar el flujo de la vía de SUMO y la regulación específica de sustratos en diversos modelos celulares humanos.

SENP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SENP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SENP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SENP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SENP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SENP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SENP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SENP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SENP2 en células tumorales con expresión de SENP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.