SENP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402148-ACT

ヒトSENP2はSUMO特異的プロテアーゼをコードしており、SUMO前駆体を成熟化させるとともに、基質タンパク質からSUMOを脱結合させることでSUMO化を可逆的に制御します。これにより、タンパク質の安定性、局在、活性が調節されます。SUMO依存性シグナル伝達を動的に制御することで、SENP2は転写制御、DNA損傷応答、細胞周期の進行、ストレス適応経路に影響を与え、ユビキチン介在性のプロテオスタシスとのクロストークにも関与します。SUMO恒常性の破綻やSENP2活性の調節異常は、炎症シグナル、ゲノム維持、腫瘍化プログラムの変化と関連づけられており、がん生物学および関連する細胞表現型の研究における重要性を支持しています。SENP2はまた、さまざまなヒト細胞モデルにおいて、SUMO経路のフラックスや基質特異的な制御を解析するためのノードとしても利用されています。

SENP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SENP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SENP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SENP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSENP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SENP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSENP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSENP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSENP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSENP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。