SEMA5A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422885

Panoramica

Sema5a codifica per il segnale guida transmembrana SEMA5A, membro della famiglia delle semaforine che regola l’orientamento degli assoni, la migrazione neuronale e la formazione delle sinapsi tramite segnalazione mediata da recettori che rimodella il citoscheletro. Oltre ai ruoli nel sistema nervoso, SEMA5A contribuisce ai programmi di adesione e motilità cellulare in molteplici tessuti, intersecando vie che determinano il movimento direzionale e la strutturazione dei tessuti. Un’alterata espressione o segnalazione di SEMA5A è stata associata a fenotipi del neurosviluppo ed è stata studiata in contesti che coinvolgono connettività aberrante e microambienti infiammatori. Nei modelli murini, la perturbazione di Sema5a viene utilizzata per analizzare i meccanismi di assemblaggio dei circuiti e per collegare la segnalazione di guida ai cambiamenti di stato cellulare durante lo sviluppo e in processi rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA5A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sema5a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sema5a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sema5a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SEMA5A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sema5a per lo studio della segnalazione di SEMA5A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sema5a critici per la funzione di SEMA5A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sema5a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SEMA5A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SEMA5A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sema5a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SEMA5A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SEMA5A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sema5a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sema5a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.