SEMA4B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422881

Panoramica

Sema4b codifica il segnale guida transmembrana SEMA4B, una semaforina di classe 4 che partecipa alla segnalazione dipendente dal contatto per regolare l’adesione cellulare, la migrazione e il rimodellamento del citoscheletro. Nei tessuti del topo, SEMA4B contribuisce alla guida assonale e all’organizzazione sinaptica ed è stata implicata nelle risposte gliali e neuronali a segnali infiammatori e correlati a lesioni. La segnalazione delle semaforine interseca vie che controllano le GTPasi della famiglia Rho e cascate di chinasi associate ai recettori, modellando la motilità direzionale e il patterning dei tessuti. Reti di semaforine deregolate, inclusa la segnalazione associata a SEMA4B, sono studiate in contesti di alterazioni del neurosviluppo, neuroinfiammazione e interazioni tumore–microambiente, in cui i segnali guida influenzano l’invasione e il posizionamento delle cellule immunitarie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA4B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sema4b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sema4b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sema4b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SEMA4B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sema4b per lo studio della segnalazione di SEMA4B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sema4b critici per la funzione di SEMA4B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sema4b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SEMA4B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SEMA4B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sema4b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SEMA4B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SEMA4B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sema4b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sema4b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.