Seipin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420617

Panoramica

Il gene murino **Bscl2** codifica **seipina**, una proteina di membrana del reticolo endoplasmatico che coordina l’adipogenesi, la biogenesi delle gocce lipidiche e l’immagazzinamento dei lipidi neutri regolando il flusso di trigliceridi e fosfolipidi nelle giunzioni tra RE e gocce lipidiche. La seipina поддержa una corretta morfologia delle gocce lipidiche e limita l’accumulo aberrante di intermedi lipidici che possono perturbare l’omeostasi del RE e la composizione di membrana. L’alterazione della funzione della seipina è collegata a fenotipi di lipodistrofia e a segnali metabolici modificati, ed è stata anche associata a processi neurodegenerativi in specifici contesti genetici. **Bscl2** rappresenta quindi un nodo utile per studiare le vie dell’omeostasi lipidica, i siti di contatto tra organelli e la vulnerabilità metabolica specifica di determinati tipi cellulari nei modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Seipin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Bscl2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Bscl2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Bscl2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Seipin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Bscl2 per lo studio della segnalazione di Seipin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Bscl2 critici per la funzione di Seipin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Bscl2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Seipin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Seipin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Bscl2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Seipin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Seipin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Bscl2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Bscl2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.