Sec6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405053-ACT

ヒトのEXOC3はSec6をコードしており、Sec6は分泌小胞を特定の細胞膜ドメインへ標的化し、ドッキングさせる過程を調整するエキソシスト係留複合体の必須サブユニットである。Sec6は極性をもったエキソサイトーシス、膜輸送、ならびに細胞骨格の協調を支え、細胞移動、神経突起伸長、上皮の極性といった過程に影響を与える。小胞係留における役割を通じて、EXOC3の機能は受容体リサイクリングや調節性分泌を制御する経路と交差し、シグナル伝達の出力形成に関与する。エキソシスト媒介の輸送の破綻は細胞極性の変化や浸潤性表現型と関連づけられており、EXOC3は疾患関連モデルにおける分泌依存的機構を研究するための有用な切り口となる。

Sec6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EXOC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Sec6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EXOC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEXOC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sec6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEXOC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSec6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEXOC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSec6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。