SDS3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-413010

Panoramica

SUDS3 codifica SDS3, un componente fondamentale del complesso corepressore trascrizionale Sin3A/HDAC, che collega il rimodellamento della cromatina alla deacetilazione degli istoni. Attraverso il reclutamento di HDAC1/2 e di fattori associati, SDS3 contribuisce a programmi di repressione trascrizionale che modellano la progressione del ciclo cellulare, la specificazione di linea cellulare e le risposte a segnali di sviluppo e di stress. La regolazione della cromatina dipendente da SDS3 influenza la stabilità del genoma e l’omeostasi epigenetica, collegando alterazioni nella composizione o nell’attività del complesso a stati di espressione genica aberranti. La deregolazione della repressione mediata da Sin3/HDAC e di vie epigenetiche correlate è spesso implicata nella biologia del cancro e, più in generale, in contesti di fenotipi neuroevolutivi e associati alla differenziazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SDS3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SUDS3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SUDS3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SUDS3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SDS3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SUDS3 per lo studio della segnalazione di SDS3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SUDS3 critici per la funzione di SDS3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SUDS3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SDS3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SDS3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SUDS3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SDS3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SDS3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SUDS3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SUDS3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.