Plásmido CRISPR de Activación (m) SDHAF2: sc-425801-ACT

El gen murino Sdhaf2 codifica SDHAF2, un factor accesorio necesario para la flavinación y la maduración de la subunidad catalítica SDHA de la succinato deshidrogenasa (complejo II). Al permitir el ensamblaje y la actividad adecuados del complejo II, SDHAF2 favorece el acoplamiento del ciclo del ácido tricarboxílico con la cadena de transporte de electrones mitocondrial, influyendo en la oxidación del succinato, el equilibrio redox y la capacidad respiratoria. La alteración de la función de SDHAF2 se asocia con disfunción mitocondrial y cambios en la señalización metabólica, incluida la acumulación de succinato, que puede afectar vías sensibles a la hipoxia y rutas epigenéticas. En consecuencia, Sdhaf2 se estudia ampliamente en bioenergética, respuestas al estrés oxidativo y modelos en los que defectos del complejo II contribuyen a la biología tumoral y a mecanismos de enfermedad neuroendocrina.

SDHAF2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Sdhaf2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SDHAF2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Sdhaf2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Sdhaf2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SDHAF2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Sdhaf2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SDHAF2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SDHAF2 en células tumorales con expresión de Sdhaf2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.