SCLIP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406430

Panoramica

STMN3 (SCLIP) è una proteina della famiglia delle stathmine arricchita nei neuroni, che lega la tubulina e modula la dinamica dei microtubuli, sostenendo la crescita assonale, la ramificazione dei neuriti e l’organizzazione sinaptica. Regolando la polimerizzazione e la stabilità dei microtubuli, SCLIP contribuisce ai processi di rimodellamento del citoscheletro che influenzano il trasporto intracellulare e la polarità neuronale. Alterazioni dell’espressione o della funzione di STMN3 sono state associate a una connettività neuronale compromessa e sono state studiate nel contesto di meccanismi neuroevolutivi e neurodegenerativi in cui l’omeostasi dei microtubuli risulta perturbata. In quanto regolatore del citoscheletro, SCLIP è rilevante per indagare le vie che collegano la dinamica dei microtubuli alla differenziazione neuronale, alla plasticità e alle risposte allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SCLIP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene STMN3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del STMN3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto STMN3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SCLIP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di STMN3 per lo studio della segnalazione di SCLIP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni STMN3 critici per la funzione di SCLIP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di STMN3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SCLIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SCLIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus STMN3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SCLIP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SCLIP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia STMN3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio STMN3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.