Scleraxis Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422833

Panoramica

Scx codifica scleraxis, un fattore di trascrizione di tipo basic helix–loop–helix che agisce come regolatore determinante di linea nello sviluppo di tendini e legamenti. Scleraxis coordina programmi genici della matrice extracellulare e la differenziazione tenogenica, integrando segnali derivanti dalla meccanotrasduzione e da vie di fattori di crescita come il TGF-β e reti di segnalazione correlate che plasmano l’identità dei fibroblasti e il rimodellamento della matrice. Nei modelli murini, l’attività di Scx è strettamente legata all’omeostasi del tessuto connettivo, influenzando l’organizzazione del collagene, la migrazione cellulare e la maturazione tissutale durante lo sviluppo e la riparazione. La disregolazione dei programmi trascrizionali associati a Scx è rilevante per gli studi su tendinopatia, rimodellamento della matrice di tipo fibrotico e risposte a lesioni muscoloscheletriche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Scleraxis (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Scx in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Scx insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Scx a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Scleraxis.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Scx per lo studio della segnalazione di Scleraxis, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Scx critici per la funzione di Scleraxis
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Scx per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Scleraxis CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Scleraxis CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Scx. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Scleraxis Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Scleraxis (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Scx per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Scx definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.