SAV1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-425662-LAC

Sav1 codifica la proteina 1 contenente il dominio WW della famiglia Salvador (SAV1), un componente scaffold della via di segnalazione Hippo che coordina la segnalazione delle chinasi MST1/2–LATS1/2 per limitare la trascrizione dipendente da YAP/TAZ. Nelle cellule murine, SAV1 contribuisce al controllo della proliferazione, dell’apoptosi e della crescita tissutale promuovendo la ritenzione citoplasmatica e la degradazione di YAP/TAZ dipendenti dalla fosforilazione. Attraverso queste funzioni, Sav1 sostiene l’inibizione da contatto e l’omeostasi delle dimensioni degli organi e si interseca con la dinamica del citoscheletro e la segnalazione a livello delle giunzioni, che influenzano le decisioni sul destino cellulare. La disregolazione della via Hippo e l’alterata attività di SAV1 sono ampiamente rilevanti nei modelli di iperproliferazione, di transizione epitelio-mesenchimale e nella biologia dei geni oncosoppressori nei sistemi dei mammiferi.

Le particelle di attivazione lentivirale SAV1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Sav1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SAV1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Sav1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SAV1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Sav1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.