SAP 30L Double Nickase Plasmid (h): sc-410126-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SAP 30L Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SAP 30L Double-Nickase-Plasmid (h) und SAP 30L Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SAP30L abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SAP 30L Double Nickase Plasmid (h) | sc-410126-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SAP 30L Double Nickase Plasmid (h2) | sc-410126-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SAP30L (SAP 30-like) kodiert eine Komponente der Sin3A/HDAC-Korepressor-Komplexe, die sequenzspezifische Transkriptionsfaktoren mit der Histon-Deacetylierung und der Verdichtung des Chromatins koppeln. Über diese Interaktionen trägt SAP30L zur Regulation von Transkriptions-Repressionsprogrammen bei, die an Zellzykluskontrolle, Differenzierung und zellulären Stressantworten beteiligt sind. Eine veränderte Regulation des HDAC-abhängigen Chromatin-Remodelings und Sin3-assoziierter Komplexe wurde mit der weitreichenden Transkriptions-Fehlregulation in Verbindung gebracht, wie sie bei Krebs und anderen Erkrankungen beobachtet wird, bei denen die epigenetische Kontrolle gestört ist. Entsprechend ist SAP30L von Interesse, um zu untersuchen, wie Repressor-Komplexe Genexpressionsnetzwerke und Chromatinzustände in menschlichen Zellen prägen.
SAP 30L Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SAP30L-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SAP30L abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SAP30L-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SAP30L-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.