SAMC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-414066

Panoramica

SLC25A26 umano codifica SAMC (trasportatore mitocondriale della S-adenosilmetionina), un trasportatore della membrana mitocondriale interna che importa la S-adenosilmetionina nella matrice per sostenere le reazioni di metilazione mitocondriali. Fornendo SAM alle metiltransferasi di RNA, proteine e metaboliti, SAMC supporta l’espressione genica mitocondriale, l’omeostasi della fosforilazione ossidativa e l’adattamento metabolico legato allo stato redox. L’alterazione del trasporto mitocondriale di SAM perturba il coordinamento del metabolismo a un carbonio tra citosol e mitocondri e può modificare la maturazione/il processamento di mtDNA e RNA mitocondriali e la funzione della catena respiratoria. Varianti che influenzano l’attività di SLC25A26 sono state associate a fenotipi di disfunzione mitocondriale, rendendo questo gene rilevante per studi meccanicistici sulla biologia delle malattie mitocondriali e sulle risposte allo stress metabolico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SAMC (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC25A26 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC25A26 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC25A26 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SAMC.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC25A26 per lo studio della segnalazione di SAMC, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC25A26 critici per la funzione di SAMC
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC25A26 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SAMC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SAMC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC25A26. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SAMC Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SAMC (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC25A26 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC25A26 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.