RUNX2 Plasmide Double Nickase (m): sc-419482-NIC

Runx2 codifica il fattore di trascrizione RUNX2, un regolatore chiave dell’impegno della linea osteoblastica e della morfogenesi scheletrica nel topo. RUNX2 coordina l’espressione dei geni della matrice ossea e integra segnali derivanti dalle vie BMP/TGF-β, dall’attività Wnt/β-catenina e dalle vie MAPK per controllare la differenziazione osteogenica, la deposizione della matrice extracellulare e la mineralizzazione. Oltre allo sviluppo, un’alterata attività di RUNX2 è associata a un rimodellamento osseo disregulated ed è stata implicata nella calcificazione patologica e in programmi delle cellule tumorali che coinvolgono transizioni di tipo EMT e metastasi con tropismo osseo. Queste caratteristiche rendono Runx2 un nodo ampiamente utilizzato per studiare la specificazione di linea, la meccano-trasduzione nell’osso e il rimodellamento delle reti trascrizionali in contesti rilevanti per la malattia.

RUNX2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Runx2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Runx2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Runx2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Runx2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.