RSAD2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402884-NIC

RSAD2 (nota anche come viperina) codifica un enzima radicale S-adenosil‑L‑metionina (SAM) inducibile dagli interferoni, che si localizza principalmente al reticolo endoplasmatico e alle membrane associate alle goccioline lipidiche per coordinare le risposte antivirali innate. RSAD2 viene indotta a valle della segnalazione dei recettori di riconoscimento dei pattern e delle vie degli interferoni di tipo I/III, e può modulare il metabolismo lipidico cellulare e l’organizzazione delle membrane, influenzando la replicazione dei patogeni. Attraverso interazioni con componenti della segnalazione dell’immunità innata ed effetti sulle reti metaboliche, RSAD2 contribuisce alla regolazione dei programmi di geni stimolati dagli interferoni e della dinamica della segnalazione infiammatoria. Un’espressione deregolata di RSAD2 è stata riportata in diversi contesti di infezione virale e in patologie associate al sistema immunitario, rendendola un nodo utile per studiare le interazioni ospite–patogeno e gli stati trascrizionali guidati dagli interferoni.

RSAD2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RSAD2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RSAD2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RSAD2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RSAD2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.