Rrn3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403709

Panoramica

RRN3 codifica Rrn3, un fattore di trascrizione associato alla Pol I che aiuta a reclutare l’RNA polimerasi I sul DNA ribosomiale e sostiene la sintesi del pre-rRNA, collegando i segnali di crescita alla biogenesi dei ribosomi. L’attività di Rrn3 è regolata da vie di segnalazione sensibili a nutrienti e stress, inclusa la regolazione mTOR-dipendente dell’inizio della trascrizione da parte della Pol I, e contribuisce alla funzione nucleolare e alla proteostasi controllando la produzione di rRNA. Poiché la trascrizione dell’rDNA è strettamente accoppiata alla proliferazione e all’adattamento cellulare allo stress, le dinamiche alterate RRN3–Pol I vengono studiate in contesti di crescita deregolata, instabilità genomica e fenotipi di stress nucleolare. RRN3 è quindi rilevante per indagare come la biogenesi dei ribosomi si interfacci con il controllo del ciclo cellulare e la riprogrammazione metabolica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rrn3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RRN3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RRN3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RRN3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rrn3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RRN3 per lo studio della segnalazione di Rrn3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RRN3 critici per la funzione di Rrn3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RRN3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rrn3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Rrn3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RRN3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rrn3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Rrn3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RRN3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RRN3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.