Romo1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417144-ACT

ROMO1 (modulador 1 de espécies reativas de oxigênio) codifica a Romo1, uma pequena proteína de membrana mitocondrial que regula a homeostase intracelular das espécies reativas de oxigênio (ROS) e a sinalização redox. A produção de ROS impulsionada por Romo1 influencia a dinâmica mitocondrial, o potencial de membrana e as respostas ao estresse oxidativo, interagindo com vias que controlam a proliferação celular, a apoptose e a sinalização inflamatória. Foi relatada expressão desregulada de ROMO1 em múltiplos contextos de câncer e doenças metabólicas, nos quais o equilíbrio redox alterado pode favorecer a sobrevivência de células tumorais, a resistência à terapia e a disfunção mitocondrial. Como modulador de ROS mitocondriais, ROMO1 é frequentemente estudado pelo seu impacto no dano oxidativo, em programas transcricionais adaptativos ao estresse e em cascatas de sinalização dependentes de ROS.

Romo1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ROMO1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Romo1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ROMO1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ROMO1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Romo1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ROMO1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Romo1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Romo1 em células tumorais com expressão de ROMO1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.