RNF10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409761

Panoramica

RNF10 codifica una proteina a dito di zinco di tipo RING, implicata nella regolazione ubiquitina-dipendente della stabilità proteica e dell’output di segnalazione. Attraverso processi associati all’attività di ligasi E3, RNF10 è stata collegata al controllo di programmi trascrizionali, della segnalazione mediata da recettori e di vie di proteostasi che influenzano la crescita e la differenziazione cellulare. Alterazioni dell’espressione o della regolazione di RNF10 sono state riportate in contesti che riguardano la biologia neurale e cardiovascolare e sono oggetto di studio per il potenziale contributo a una omeostasi cellulare disfunzionale nella malattia. RNF10 è quindi rilevante per indagare come il rimodellamento delle reti di segnalazione mediato dall’ubiquitina influenzi l’espressione genica e le decisioni sul destino cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RNF10 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RNF10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RNF10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RNF10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RNF10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RNF10 per lo studio della segnalazione di RNF10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RNF10 critici per la funzione di RNF10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RNF10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RNF10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RNF10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RNF10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RNF10 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RNF10 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RNF10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RNF10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.