Reelin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401862-ACT

Il gene umano **RELN** codifica la reelin, una grande glicoproteina della matrice extracellulare secreta che coordina la migrazione neuronale, la laminazione corticale e la sinaptogenesi durante lo sviluppo cerebrale e nei circuiti dell’adulto. La reelin segnala principalmente attraverso i recettori delle lipoproteine **VLDLR** e **LRP8 (ApoER2)** per attivare l’adattatore **DAB1**, modulando le chinasi della famiglia Src e la conseguente dinamica del citoscheletro che determina la crescita dei neuriti e la plasticità sinaptica. Le vie dipendenti da RELN interagiscono con la trasmissione glutammatergica, il rimodellamento delle spine dendritiche e programmi genici dipendenti dall’attività che influenzano la connettività di rete. Un’espressione o una segnalazione di RELN disregolata è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici sulla formazione dei circuiti e sulla funzione sinaptica.

Reelin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RELN senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Reelin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RELN nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RELN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Reelin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RELN nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Reelin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Reelin nelle cellule tumorali con espressione di RELN silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.