RBM7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408808-ACT

O RBM7 humano codifica uma proteína de ligação a RNA que atua como componente central do complexo NEXT (nuclear exosome targeting), em parceria com ZCCHC8 e SKIV2L2/MTR4, para direcionar RNAs nucleares específicos ao exossomo de RNA para processamento e degradação. O RBM7 reconhece preferencialmente elementos ricos em U e contribui para a vigilância de RNA ao promover a eliminação de transcritos a montante de promotores, RNAs de enhancers e outros RNAs não codificantes de curta duração, moldando assim a produção transcricional e mantendo a homeostase de RNA no núcleo. Ao acoplar o controle de qualidade do RNA à transcrição e ao metabolismo de RNAs associados à cromatina, o RBM7 influencia a estabilidade do genoma e programas de expressão gênica responsivos ao estresse. A desregulação de vias de degradação de RNA nuclear envolvendo RBM7 tem sido associada a redes regulatórias gênicas alteradas e é relevante para estudos de remodelamento transcricional associado ao câncer e de fenótipos do neurodesenvolvimento ligados a defeitos no processamento de RNA.

RBM7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RBM7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RBM7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RBM7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RBM7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RBM7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RBM7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RBM7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RBM7 em células tumorais com expressão de RBM7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.