RBM35A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-405645-ACT-2

O ESRP1 humano (epithelial splicing regulatory protein 1; RBM35A) codifica um fator de splicing ligante de RNA que reconhece motivos ricos em GU para controlar programas de splicing alternativo característicos de células epiteliais. O ESRP1 ajuda a manter a identidade epitelial ao coordenar a seleção de isoformas em transcritos envolvidos na adesão célula–célula, na organização do citoesqueleto, na polaridade e em redes de sinalização associadas à transição epitélio–mesênquima (EMT), incluindo vias que se intersectam com a regulação de isoformas de FGFR e CD44. O splicing mediado por ESRP1 quando desregulado tem sido associado a estados de EMT alterados e a fenótipos de progressão tumoral em múltiplos cânceres derivados de epitélio, implicando-o como um nó-chave nas mudanças de processamento de RNA observadas durante o remodelamento relacionado à metástase. A edição gênica de ESRP1 permite estudos mecanísticos da regulação dependente de splicing, transcriptômica com resolução de isoformas e a investigação funcional de programas de EMT e de diferenciação epitelial em modelos celulares humanos.

RBM35A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ESRP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RBM35A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ESRP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ESRP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RBM35A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ESRP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RBM35A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RBM35A em células tumorais com expressão de ESRP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.