Plásmido CRISPR de Activación (h) RASAL3: sc-404999-ACT

RASAL3 (activador de la proteína RAS tipo 3) codifica una proteína activadora de la GTPasa Ras que favorece la conversión de Ras-GTP activo a Ras-GDP inactivo, limitando así la amplitud y la duración de la señalización dependiente de Ras. Mediante la regulación negativa de Ras/MAPK y de vías relacionadas de pequeñas GTPasas, RASAL3 contribuye al control de los estados de activación celular, las señales de proliferación y los programas transcripcionales aguas abajo. Su actividad es especialmente relevante en contextos de señalización de células inmunitarias, donde el ajuste fino de la vía de Ras influye en las respuestas impulsadas por receptores y en la diferenciación celular. La desregulación del control de la vía de Ras está implicada en procesos inflamatorios y oncogénicos, lo que convierte a RASAL3 en un nodo útil para estudios mecanísticos de la homeostasis de la señalización.

RASAL3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RASAL3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RASAL3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RASAL3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RASAL3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RASAL3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RASAL3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RASAL3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RASAL3 en células tumorales con expresión de RASAL3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.