Ras-GRF2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404141-ACT

ヒトのRASGRF2は、カルシウムおよびジアシルグリセロールによって制御されるグアニンヌクレオチド交換因子であるRas-GRF2をコードしており、RASを活性化し、RACシグナル伝達を調節し得ることで、細胞外からの刺激を細胞内のMAPK/ERKカスケードの動態へと結び付けます。Ras-GRF2は、受容体型チロシンキナーゼおよびGPCR関連経路からの入力を統合し、増殖、分化、細胞骨格リモデリング、ならびに神経可塑性に関連するシグナル伝達に影響を与えます。神経系では活動依存的なシグナル伝達とシナプス機能に寄与し、他の細胞環境ではERK依存性エフェクターを介して増殖因子駆動性の転写プログラムを組み替えることがあります。RAS経路シグナルの破綻は、がん化や神経発達の表現型と広く関連するため、RASGRF2は文脈依存的なRAS活性化とフィードバック制御を解析するうえで有用な結節点となります。

Ras-GRF2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RASGRF2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ras-GRF2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RASGRF2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRASGRF2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ras-GRF2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRASGRF2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRas-GRF2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRASGRF2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRas-GRF2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。